Cristina+Fernandez

No ha incluido el análisis de la secuencia, el trabajo no tiene referencias,luego las incluye al final pero.....  ** ANÁLISIS DE **  ** “DRUG RESISTANCE EFFLUX PROTEIN “ ****DE //__RHODOCOCCUS__//

iNGENIERÍA GENÉTICA DE MICROORGANISMOS uNIVERSIDAD DE LEÓN cRISTINA fERNÁNDEZ dÍEZ  **__Resumen:__ Son un grupo de microorganismos que no esporulan y que no son móviles. Se secuenció el género ( se secuencia una especie, no un género)  en el 2006 ( falta una referencia ) conteniendo 9.7Mpb y contiene tres plásmidos lineales. Se caracteriza a demás por su rápida velocidad de crecimiento y su ciclo de vida sencillo. (referencia)  Es un microorganismo Gram positivo que contiene varias especies entre las que se encuentra //R. equi// que produce enfermedades en los humanos, aunque la mayoría no son perjudiciales. Rhodococcus es un género importante por su capacidad para catabolizar una gran gama de compuestos bioactivos, producir esteroides y participar en la formación de combustibles fósiles Es un género que también se encarga de la biodegradación de contaminantes organicos. El marco de lectura escogido corresponde a una drug resistance efflux protein que al parecer es una proteína trasmembrana que es resistente ante las sustancias extrañas ??????, <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> fármacos o drogas que pueden alterar el funcionamiento normal de la célula. <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">La proteína es tiene un alto contenido en G+C (las proteínas no tiene alto ni bajo contenido en G+C) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 14pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ** <span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">__ INTRODUCCIÓN: __ **(faltan referencias, no se puede escribir un trabajo sin referencias) <span style="font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Rhodococcus <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> (cursiva) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> es un género que pertenece a la familia <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">(orden) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> de los Actinomicetales, son un subgrupo de las bacterias que tienen ácidos micólicos en la pared celular y se ha podido comprobar que tienen relación filogenética con otros géneros como Mycobacterium (cursiva) y Corynobacterium ( Corynebacterium y en cursiva) entre otras, a partir del RNA ribosomal 16S. ** (Gráfica1) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Los microorganismos que pertenecen al género Rhodococcus (cursiv) están generalmente muy distribuidos por el medio ambiente pudiéndose encontrar también en suelos, reservorios de agua, ríos y otros ambientes acuáticos. Algunos microorganismos que pertenecen a éste género son capaces de generar enfermedades en los humanos, por lo que pueden ser considerados patógenos oportunistas. **
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">Rhodococcus ( <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; text-shadow: none;">los nombres de especies "cursiva") <span style="font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> es un microorganismo que se adapta fácilmente a medios adversos y diversos por eso esta ampliamente distribuido y pertenece al grupo de los Actinomycetales <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; text-shadow: none;">???? <span style="font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">?, teniendo estructura bacilar.
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Varias especies han sido descritas a partir de las características de su membrana (????????) incluyendo genes implicados en la virulencia, en la degradación metabólica, análisis genéticos y organización de operones entre otros. Según estos datos las diferentes especies que se engloban en este género son: R. rhodochrous que incluye a R. bronchialis,, R. corallinus, R. equi, R. erythropolis, R. ruber, R. rubropertinctus y R. térrea, R. coprophilus. (todos los nombres deben ir en cursiva)

__<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Características generales del género: __<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;"> (referencias?) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> (Hubiera sido conveniente hacer referencia a las caracteristicas del género definidas en el Bergey) __<span style="font-size: 12pt; line-height: 150%; color: rgb(128, 0, 128);">
 * 1) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Microorganismos Gram positivos en cuya pared celular está compuesta principalmente por péptido glucano que rodea a la membrana citoplasmática. También encontramos ácidos teitoícos que se unen covalentemente con el péptido glucano.
 * 2) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Alto contenido en G+C (67-73%)
 * 3) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Crecen bien a temperaturas en torno a los 30-37ºC
 * 4) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Son bacterias agrupadas de forma bacilar a partir de la fragmentación de un filamento vegetativo ramificado.
 * 5) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Tienen colonias mucosoas, lisas o rugosas de varios colores e incluso incoloras, pero estas sulen ser variantes de las células parentales.
 * 6) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Sensibles a lisozima
 * 7) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Catalasas positivas
 * 8) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Metabolismo oxidativo de los carbohidratos.
 * 9) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Fosfolípidos principales:
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Disfosfatidil glicerol
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Fosfatidil etanolamina
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Fosfatidilinositol dimanósido

MATERIALES Y MÉTODOS __ : <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Necesitamos, para empezar a trabajar, un plasmado ( plásmido?????) suicida que no puede replicarse en el huésped, como es el pOJ260  **( Imagen 1),**<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;"> es un plásmido de //E. coli.// Así mismo también es necesario tener la secuencia de la proteína elegida para poder llevar a cabo los diferentes experimentos que nos indicarán finalmente la procedencia de la misma, su localización función etc,. ( **Imagen 3**<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">)

(materiales y métodos muy escasos) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> <span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">__ Análisis del gen que codifica para la proteína elegida __ : <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> ** A esta amplificación le tenemos que poner sitios de corte para que el fragmento amplificado se pueda clonar en el plásmido suicida <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">(si clona el gen en un plasmido suicida, no entiendo que va a hacer luego con él) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> que hemos elegido. En este caso ponemos sitios de corte con la enzima Hind III que pertenece a la región de clonación múltiple del plásmido suicida elegido. <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">(  Diseño 1)** <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">
 * 1) ** __ AMPLIFICACIÓN DEL GEN POR PCR __ :  **
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Para ello necesitamos la secuencia de nucleótidos del gen para diseñar un primer directo a partir del extremo 5’ de la cadena complementaria y otro a partir del extremo 3’ de la cadena molde, pero a esta última, le damos la vuelta para hacerla en sentido 5’- 3’ y le quitamos el codón de stop <span style="font-size: 12pt; color: rgb(255, 0, 0); font-family: 'Times New Roman',Times,serif; font-weight: normal; text-transform: none; line-height: 150%;"> <span style="font-size: 12pt; color: rgb(255, 0, 0); font-family: 'Times New Roman',Times,serif;">(no lo tiene claro, se quita el codon de STOP para hacer una fusión génica) ****<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">para que se pueda leer el primer completo.

<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> **Para clonar un fragmento interno del gen lo primero que necesitamos es saber cuales pueden ser los mejores primers. Para averiguarlo nosotros utilizamos un programa informático<span style="color: rgb(255, 0, 0);"> (¿qué programa?) que estadísticamente te señala la mejor probabilidad, <span style="background-color: rgb(255, 255, 0);">a parte de darte otras opciones. De la misma manera también nos indica la<span style="background-color: rgb(255, 255, 0);"> temperatura de los oligonucleótidos <span style="color: rgb(255, 0, 0);">(temperatura de fusión), su contenido en G+C y su tamaño. Como el fragmento interno lo tenemos que introducir en el plásmido suicida les ponemos a los primers sitios de corte en los extremos 5’ que se corresponden a la enzima Eco RI para que el fragmento pueda ser clonado en el sitio de clonación múltiple del plásmido suicida.** <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">**Para realizar la delección tenemos que quitar un número múltiplo de tres nucleótidos para que se pueda formar después RNAm que permita que se siga expresando el gen de abajo. Nosotros le hemos quitado un fragmento de 120 nucleótidos en la posición (781-901).** __<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; color: rgb(128, 0, 128);">Análisis de la proteína elegida ____<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">: __ <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-decoration: none; font-family: Times New Roman;"> ** <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">**Se utiliza una cola formada por 6 Histidinas para realizar purificaciones de la proteína por cromatografía de afinidad usando metales inmóviles sobre una matriz o por cromatografía con resinas de níquel.** <span style="background-color: rgb(255, 255, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Una de las ventajas de esta técnica es que se puede utilizar incluso, aunque el DNA este desnaturalizado y en éste caso podremos eluir la proteína en cuestión con imidazol trabajando con un buffer fisiológico:PBS <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">. <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Haga el favor de releer estas frases y encontrar los errores. <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> Las colas de Histidina sólo las colocamos en el extremo 5’ de la cadena molde. <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Para sacar la proteína del DNA donde esta integrado le ponemos sitios de corte correspondientes a Hin III y así poder purificarlo. (  **Diseño 4**<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">. ** <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">**Mutamos un codon de la proteína que estamos tratando en una zona interna de la misma<span style="background-color: rgb(255, 255, 0);"> para ver que es lo que ocurre después. <span style="background-color: rgb(255, 0, 0);">Que quiere decir con esta frase??? Para ello debemos tener en cuenta que los cambios más significativos se dan con el cambio de la primera y segunda base. Debemos hacer cuatro primers y uno de ellos mutagénico, es el que va a llevar el cambio de base en su secuencia. Nosotros hemos hecho el cambio para el aminoácido leucina, lo hemos cambiado por la valina: cabiamos la primera base correspondiente con citosina por guanina.** <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">**La proteína GFP nos va a permitir obtener datos relacionados con su localización, dinámica e interacciones moleculares. Es una proteína que desde su descubrimiento ha sido utilizada en medicina y en investigación en general.** <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Para llevar a cabo el proceso debemos hacer cuatro primers. El segundo debe llevar el inicio del gen del tercer primer y el tercero el inicio del gen del segundo. Es importarte quitar el codon de “stop” del segundo primer para que se puedan leer bien los primers sin que haya ningún paro. **(Diseño 6**<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 14pt; text-transform: none; line-height: 150%; text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">
 * 1) **__ AMPLIFICACIÓN DE FRAGMENTOS INTERNOS DEL GEN __ : **
 * <span style="font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">( ** Diseño 2) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">
 * 1) **__ DELECCIÓN DE UN FRAGMENTO INTERNO DEL GEN __ : <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%;">(para qué va a hacer esto????) ) **
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Los primer que tenemos que realizar son cuatro, el primero y el segundo se realizan de forma habitual y el segundo y el tercero también pero teniendo en cuenta que tienen que estar flanqueando la zona de delección del gen.(  **Diseño3)
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">
 * 1) **__ AMPLIFICACIÓN DEL GEN CON COLAS DE HISTIDINA __ **
 * <span style="background-color: rgb(255, 255, 0); font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">La histidina se añade en forma de nucleótidos para que cuando se produzca la traducción de la proteína el aminoácido en cuestión se exprese.
 * 1) **__ MUTAGÉNESIS DIRIGIDA DEL GEN . __ **
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Los primers 1y 4 se hacen de forma habitual pero el seguno es el que lleva el cambio de base y el tercero es su complementario.(  **Diseño 5)
 * 1) **__ FUSIÓN GÉNICA ENTRE LA PROTEINA Y LA GFP: __ **
 * <span style="font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0); font-family: 'Times New Roman',Times,serif; background-color: rgb(255, 255, 0);">Se considera una proteína de fusión porque no tiene función conocida. ?????????

**<span style="color: rgb(128, 0, 128);">__RESULTADOS Y DISCUSIÓN__ **__<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">: __<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">La proteína drug resistance efflux pertenece a la superfamilia Major Facilitator (Tabla1) que es una de las dos grandes familias de transportadores de membrana.( Fulman N.; Bibi,E. 2009). Gracias a la fusión realizada entre nuestro gen y la gfp pudimos determinar, mediante irradación con luz ultavioleta, que nuestra proteína es una proteína transmembrana sin péptido líder  **(Gráfica 2)**<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">, es una proteína integral que atraviesa la membrana varias veces conteniendo tres dominios principales, de los cuales, dos son hidrofilicos: citosólico y extracitosólico, y otro es hidrófobo, dominio transmembrana de interactuación con la bicapa lipídica.( ** Imagen 2 y Gráfica 3) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Al realizar la delección de un fragmento interno del gen la proteína pierde su funcionalidad por lo que podemos sacar en conclusión que ese fragmento del gen es el que lleva la responsabilidad de que la proteína sea una <span style="background-color: rgb(255, 255, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">molécula resistente al paso de sustacias perjudiciales o fármacos a la célula. <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;">Tiene claro el concepto de proteína de reflujo???? <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> Por otra parte al hacer la mutación de una base de un codon que codifica para leuicina la funcionalidad de la proteína no varía aunque el fenotipo de la proteína cambia drásticamente, por lo que habremos alterado la conformación espacial de la mísma. Adicionalmente también aparecen cepas silvestres que no llevan la mutación. <span style="font-family: Times New Roman; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Es cortada por 21 enzimas de restricción modificación de las que menos cortes realizan son CNBr, Lys C, Lys N, NTCB y la prolina endopeptidasa.( ** Tabla 1). <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 11pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 11pt; text-transform: none; line-height: 150%; text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 14pt; line-height: 150%; text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">Donde están las imágenes???????
 * <span style="font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 0);">Es una proteína relacionada con la inactivación de las drogas, por lo que puede facilitar a la célula que la contenga el crecer en condiciones adversas y muy diversas. Drug-specific efflux (eg that of tetracycline) has been recognised as the major mechanism of resistance to this drug in Gram-negative bacteria.
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Dentro de las características físico-químicas resaltamos la <span style="background-color: rgb(255, 255, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">polaridad positiva en la prueba de Gram <span style="color: rgb(255, 0, 0); font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%;">(me puede explicar esto????) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">y su hidrofobidad. ( ** Gráficas 4, 5 y 6). <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%;">Al hacer la prueba de la proteína coiled-coil dio como resultado negativo, por lo tanto no podemos considerar que nuestra proteína tenga dos cadenas idénticas respecto a la secuencia de aminoácidos de la misma.( **Gráfica 7)

<span style="font-size: 14pt; line-height: 150%; color: rgb(128, 0, 128);"> __Imágenes:__ <span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman; font-size: 10pt; line-height: 150%;"> //__ Imagen 1 __//// : plásmido suicida utilizado // <span style="text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman; font-weight: normal;"> //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Imagen 2 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: Disposición de proteína transmembrana // <span style="font-weight: normal; text-transform: none; text-shadow: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; text-decoration: none; font-family: Times New Roman;"> __<span style="font-size: 14pt; text-transform: none; line-height: 150%; text-shadow: none; color: rgb(128, 0, 128);">DISEÑO DE PRIMERS ____<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: __ <span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> __ Secuencia de aminoácidos: __ >PNLQRIYPSGQRRLWWNRGSVVSRRATGRKAHTMTVESLEDEPRVGRREWIGLGVLAAGLSLIVVDGTIVNVSLPVIIDELGLDLTDAQWINSIYSVVFAALLLTAGRLGDRLGRRMLFVAGVVVFIGGSLMAAASESSTALIVARVVQGVGGALVLPCTLSTVNATFRGRDRAIAFGVWGAVISGMAAVGPLLGGWLTTSFTWPWIFLVNVPIGILVIIGAFLTVPETRAKITVPGLDVVGLLLSAIGFGALIFALIEGQTIGWWKPIADLHVFGATWPSTAPISATPVVAAVGVVALIGFVVWERHRARIRYSAILDLGLFRFHTFSWGNCTAMAVAIGEFGLLLVLPLFLVNAYGLSTLGAGYVLAVMALGAFASGAAARHVTARFGSPRTVMLGLALEVVGVLAFALYLRPSSAAWLLALLLAIYGLGLGLASAQLTGTVLVDIPTSESGQGSATQSTVRQLGAALGTAILGTVLSLGLAHALTDRLEPVALPPQVESGLVDSTRDSAGGTIPPIREQGDHGRLGPAGPETADALSEGFADATRWSLFVAAGFLAVGLATATRLQHRRPEDDDAAATATA
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">El marco de lectura elegido corresponde a la “drug resistance efflux protein”que se encuentra situada entre 3710-5464 nucleótidos de la secuencia completa que corresponde a:

__ Secuencia de nucleótidos(3710/5464): __ >ccgaatctgcaacggatttacccgtcggggcagcgtcggctctggtggaatcgcggtagcgtcgtatcgagacgcgccaccgggagaaaggcgcacaccatgaccgtggaatcgctcgaggacgaaccgcgggtaggccgccgggagtggatagggctcggcgtcctcgccgccggtctgtcgctcatcgtcgtcgacggcaccatcgtcaacgtctcgctcccggtgatcatcgacgaactgggtctcgacctcaccgacgcccagtggatcaacagcatctactcggtggtgttcgcagcactgctgctcacggccggccgcctcggcgaccggctgggccgccggatgctcttcgtcgccggtgtcgtcgtgttcatcggcggcagcctgatggcggcggcgtcggagtcctcgacggcgctgatcgtcgcccgcgtcgtgcagggcgtcggcggcgcgctggtgctgccgtgcacgctgtcgacggtcaacgccacgttccgcggacgcgaccgggccatcgcgttcggagtgtggggcgcggtcatctccggcatggcggccgtgggcccgctgctcggcggctggctcacgacgtcgttcacgtggccgtggatcttcctggtgaacgtgccgatcggcatcctcgtcatcatcggcgcgtttctcacggtccccgagacccgggcgaagatcaccgtgcccggactcgacgtggtgggtctgctgctgagcgcaatcggtttcggcgcgttgatcttcgcgctcatcgagggccagaccatcggttggtggaagcccatcgcggatctccacgtgttcggggcgacgtggccgtcgacggcgccgatctcggccaccccggtcgtcgccgccgtcggcgtcgtcgcactcatcggattcgtcgtgtgggagcggcaccgggcgcggatccggtactccgccatcctcgatctggggctcttccggttccacaccttcagctggggcaactgcaccgcgatggcggtcgcgatcggcgagttcggtctgctgctggtgctaccgctgttcctcgtcaacgcgtacgggctcagcacgctgggcgctggctacgtgctcgcggtgatggcgctcggcgcgttcgcgtccggagcggccgcgcgtcacgtcaccgcccgcttcggttccccgcgcaccgtgatgctcggtctggcactcgaggtggtcggcgtcctggcgttcgcgctgtacctgcggccgtcgtcggcggcgtggctgctggcgctgctgctcgcgatctacggcctcgggctggggctcgcgtcggcgcagctcaccggcacggttctcgtcgacatcccgacgtcggagtccggccagggatcggcgacgcagagcacggtccgtcagctgggcgccgcgctgggcactgcaatcctggggaccgtgctctcgctcgggctcgcgcacgccctcaccgaccgcctcgaaccggtggcgctgccgccgcaggtggagtcgggactcgtcgacagcacccgcgactcggccggcggcaccatcccaccgatccgggagcagggcgaccacggcaggctcggcccggccggacccgagaccgccgacgcgctgtccgagggcttcgccgacgccacccgctggtcgctgttcgtcgcggccggattcctcgccgtcggactcgcaaccgccacccgactgcagcaccgacgcccggaggacgacgacgccgcggccaccgccacggcgtag

<span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">

** //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Imagen 3 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: Selección de marcos de lectura de la secuencia dada // <span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">__<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; text-shadow: none;">Análisis del gen que codifica para la proteína elegida: __<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; text-shadow: none;">: ** //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Diseño 1 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: primers para la amplificación del gen // <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">1 <span style="background: yellow none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCGAATCTGCAACGG ATTTACCCGTCGGGGCAGCGTCGGCTCTGGTGGAATCGCGGTAGC <span style="display: block; text-align: right; font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">1 GGCTTAGACGTTGCCTAAATGGGCAGCCCCGTCGCAGCCGAGACCACCTTAGCGCCATCG
 * <span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">
 * <span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">

61 GTCGTATCGAGACGCGCCACCGGGAGAAAGGCGCACACCATGACCGTGGAATCGCTCGAG 61 CAGCATAGCTCTGCGCGGTGGCCCTCTTTCCGCGTGTGGTACTGGCACCTTAGCGAGCTC

1561 GAGCAGGGCGACCACGGCAGGCTCGGCCCGGCCGGACCCGAGACCGCCGACGCGCTGTCC 1561 CTCGTCCCGCTGGTGCCGTCCGAGCCGGGCCGGCCTGGGCTCTGGCGGCTGCGCGACAGG

1621 GAGGGCTTCGCCGACGCCACCCGCTGGTCGCTGTTCGTCGCGGCCGGATTCCTCGCCGTC 1621 CTCCCGAAGCGGCTGCGGTGGGCGACCAGCGACAAGCAGCGCCGGCCTAAGGAGCGGCAG

1628 GGACTCGCAACCGCCACCCGACTGCAGCACCGACGCCCGGAGGACGACGACGCCGCGGCC 1628 CCTGAGCGTTGGCGGTGGGCTGACGTCGTGGCTGCGGGCCTCCTGCTGCTGCGGCGCCGG <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;"> 1741 ACCGCCACGGCGTAG 1741 T<span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GGCGGTGCCGC ATC <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">Primer directo: 5’-CCCAAGCTT <span style="background: yellow none repeat scroll 0% 0%; font-weight: normal; font-size: 10pt; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">CCGAATCTGCAACGG <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">-3’

Primer inverso: 5’-CCCAAGCTT <span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; font-weight: normal; font-size: 10pt; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">CGCCGTGGCGG <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">-3’

Sitios de corte para Hind III <span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> ** //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Diseño 2: __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> primers para la amplificación interna del gen // <span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> code code
 * 1 ccgaatctgcaacggatttacccgtcggggcagcgtcggctctggtggaatcgcggtagc **

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 * 61 gtcgtatcgagacgcgccaccgggagaaaggcg cacaccatgaccgtggaat cgctcgag **

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 * 121 gacgaaccgcgggtaggccgccgggagtggatagggctcggcgtcctcgccgccggtctg **

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 * 181 tcgctcatcgtcgtcgacggcaccatcgtcaacgtctcgctcccggtgatcatcgacgaa **

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 * 241 ctgggtctcgacctcaccgacgcccagtggatcaacagc atctactcggtggtgttcgc a **

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 * 301 gcactgctgctcacggccggccgcctcggcgaccggctgggccgccggatgctcttcgtc **

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 * 361 gccggtgtcgtcgtgttcatcggcggcagcctgatggcggcggcgtcggagtcctcgacg **

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 * 421 gcgctgatcgtcgcccgcgtcgtgcagggcgtcggcggcgcgctggtgctgccgtgcacg **

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 * <span style="font-weight: normal; color: windowtext; text-shadow: none; mso-ansi-language: ES; textshadow: none; msoansilanguage: ES; msospacerun: yes;">  **

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code code <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">
 * PRIMER 1:  5’-CGGAATTC cacaccatgaccgtggaat -3’ **
 * PRIMER 2: 5’-CGGAATTC<span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GCGAACACCACCGAGTAGAT -3’

La enzima de restricción usada es la Eco RI** <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 10pt; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 10pt; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> code code
 * **__<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">Características de los primers seleccionados __ **<span style="color: rgb(128, 0, 128);">__:__
 * No mispriming library specified **

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 * Using 1-based sequence positions **

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 * OLIGO           start  len      tm     gc%   any    3' seq  **

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 * LEFT PRIMER        94   19   60.24   52.63  4.00  2.00 cacaccatgaccgtggaat **

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 * RIGHT PRIMER      299   20   60.14   55.00  2.00  2.00 gcgaacaccaccgagtagat **

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 * SEQUENCE SIZE: 1755 **

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 * INCLUDED REGION SIZE: 1755 **

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code code <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">
 * PRODUCT SIZE: 206, PAIR ANY COMPL: 4.00, PAIR 3' COMPL: 2.00 **

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 * <span style="font-weight: normal; color: windowtext; font-family: Symbol; mso-fareast-font-family: Symbol; text-shadow: none; mso-ansi-language: EN-US; mso-bidi-font-family: Symbol; textshadow: none; msoansilanguage: EN-US; msolist: Ignore; msofareastfontfamily: Symbol; msobidifontfamily: Symbol;">·         __<span style="font-weight: normal; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; mso-ansi-language: EN-US;">Oligonucleótidos adicionales ____ : __**

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 * start len      tm     gc%   any    3' seq  **

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 * 1 LEFT PRIMER        94   19   60.24   52.63 4.00  2.00 cacaccatgaccgtggaat **

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 * RIGHT PRIMER      257   20   59.69   60.00  6.00  2.00 gtgaggtcgagacccagttc **

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 * PRODUCT SIZE: 164, PAIR ANY COMPL: 4.00, PAIR 3' COMPL: 2.00 **

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 * 2 LEFT PRIMER         1   20   60.96   45.00  5.00  2.00 ccgaatctgcaacggattta **

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 * RIGHT PRIMER      194   19   60.00   57.89  3.00  1.00 acgacgatgagcgacagac **

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 * PRODUCT SIZE: 194, PAIR ANY COMPL: 4.00, PAIR 3' COMPL: 0.00 **

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 * 3 LEFT PRIMER        95   19   59.17   52.63  4.00  3.00 acaccatgaccgtggaatc **

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 * RIGHT PRIMER      299   20   60.14   55.00  2.00  2.00 gcgaacaccaccgagtagat **

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 * PRODUCT SIZE: 205, PAIR ANY COMPL: 4.00, PAIR 3' COMPL: 3.00 **

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 * 4 LEFT PRIMER       617   20   60.51   55.00  4.00  2.00 ggatcttcctggtgaacgtg **

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 * RIGHT PRIMER      774   19   59.50   52.63  4.00  2.00 gatgagcgcgaagatcaac **

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 * PRODUCT SIZE: 158, PAIR ANY COMPL: 7.00, PAIR 3' COMPL: 2.00 **

code code <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; text-decoration: none; font-family: Times New Roman;"> //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Diseño 3 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: Delección de un fragmento interno del gen // 1 <span style="background: yellow none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCGAATCTGCAACGGATTTAC CCGTCGGGGCAGCGTCGGCTCTGGTGGAATCGCGGTAGC 1 GGCTTAGACGTTGCCTAAATGGGCAGCCCCGTCGCAGCCGAGACCACCTTAGCGCCATCG
 * <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">

61 GTCGTATCGAGACGCGCCACCGGGAGAAAGGCGCACACCATGACCGTGGAATCGCTCGAG 61 CAGCATAGCTCTGCGCGGTGGCCCTCTTTCCGCGTGTGGTACTGGCACCTTAGCGAGCTC

121 GACGAACCGCGGGTAGGCCGCCGGGAGTGGATAGGGCTCGGCGTCCTCGCCGCCGGTCTG 121 CTGCTTGGCGCCCATCCGGCGGCCCTCACCTATCCCGAGCCGCAGGAGCGGCGGCCAGAC

661 GGCGCGTTTCTCACGGTCCCCGAGACCCGGGCGAAGATCACCGTGCCCGGACTCGACGTG 661 CCGCGCAAAGAGTGCCAGGGGCTCTGGGCCCGCTTCTAGTGGCACGGGCCTGAGCTGCAC

721 GTGGGTCTGCTGCTGAGCGCAATCGGTTTCGGCG<span style="background: gray none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CGTTGATCTTCGCGCTCATCGAGGGC 721 CACCCAGACGACGACTCGCGTTAGCCAAAGCCGC<span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GCAACTAGAAGCGCGAGTAGCTCCCG

781 <span style="background: purple none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CAGACCATCGGTTGGTGGAAGCCCATCGCGGATCTCCACGTGTTCGGGGCGACGTGGCCG 781 <span style="background: purple none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GTCTGGTAGCCAACCACCTTCGGGTAGCGCCTAGAGGTGCACAAGCCCCGCTGCACCGGC

841 <span style="background: purple none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">TCGACGGCGCCGATCTCGGCCACCCCGGTCGTCGCCGCCGTCGGCGTCGTCGCACTCATC 841 <span style="background: purple none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">AGCTGCCGCGGCTAGAGCCGGTGGGGCCAGCAGCGGCGGCAGCCGCAGCAGCGTGAGTAG

901 <span style="background: purple none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GGATTCGTCGTGTGGGAGCGGCACCGGGCGCGGATCCGGTACTCCGCCATCCTCGATCTG 901 <span style="background: purple none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCTAAGCAGCACACCCTCGCCGTGGCCCGCGCCTAGGCCATGAGGCGGTAGGAGCTAGAC

961 <span style="background: fuchsia none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GGGCTCTTCCGGTTCCACACC TTCAGCTGGGGCAACTGCACCGCGATGGCGGTCGCGATC 961 <span style="background: silver none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCCGAGAAGGCCAAGGTGTGG AAGTCGACCCCGTTGACGTGGCGCTACCGCCAGCGCTAG

1021 GGCGAGTTCGGTCTGCTGCTGGTGCTACCGCTGTTCCTCGTCAACGCGTACGGGCTCAGC 1021 CCGCTCAAGCCAGACGACGACCACGATGGCGACAAGGAGCAGTTGCGCATGCCCGAGTCG

1621 GAGGGCTTCGCCGACGCCACCCGCTGGTCGCTGTTCGTCGCGGCCGGATTCCTCGCCGTC 1621 CTCCCGAAGCGGCTGCGGTGGGCGACCAGCGACAAGCAGCGCCGGCCTAAGGAGCGGCAG

1681 GGACTCGCAACCGCCACCCGACTGCAGCACCGACGCCCGGAGGACGACGACGCCGCGGCC 1681 CCTGAGCGTTGGCGGTGGGCTGACGTCGTGGCTGCGGGCCTCCTGCTGCTGCGGCGCCGG

1741 ACCGCCACGGCGTAG 1741 <span style="background: aqua none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">TGGCGGTGCCGC ATC

PRIMER 1: 5’-CGGGATCC-ATG-<span style="background: yellow none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCGAATCTGCAACGGATTTAC -3’

PRIMER 2: 5’-<span style="background: silver none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GGTGTGGAACCGGAAGAGCCC <span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GCCCTCGATGAGCGCGAAGATCAACG -3’

PRIMER 3: 5’-<span style="background: gray none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;"> CGTTGATCTTCGCGCTCATCGAGGGC <span style="background: fuchsia none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GGGCTCTTCCGGTTCCACACC -3’

PRIMER 4: 5’-CGGGATCC<span style="background: aqua none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CGCCGTGGCGGT -3’

Sitio de corte Bam HI <span style="font-size: 10pt; font-family: 'Courier New'; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-size: 10pt; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; color: windowtext; text-shadow: none; text-decoration: none; font-family: Times New Roman;"> __<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; text-shadow: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">Análisis de la proteína: __ <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; text-shadow: none; text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> **//__ Diseño 4 __//// : purificación con colas de histidina //<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Comic Sans MS'; text-shadow: none;"> <span style="font-size: 10pt; text-transform: none; font-family: 'Courier New'; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-size: 10pt; font-family: 'Courier New'; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">1 <span style="background: yellow none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCGAATCTGCAACGG ATTTACCCGTCGGGGCAGCGTCGGCTCTGGTGGAATCGCGGTAGC <span style="display: block; text-align: right; font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">1 GGCTTAGACGTTGCCTAAATGGGCAGCCCCGTCGCAGCCGAGACCACCTTAGCGCCATCG
 * <span style="font-size: 10pt; text-transform: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">

61 GTCGTATCGAGACGCGCCACCGGGAGAAAGGCGCACACCATGACCGTGGAATCGCTCGAG 61 CAGCATAGCTCTGCGCGGTGGCCCTCTTTCCGCGTGTGGTACTGGCACCTTAGCGAGCTC

121 GACGAACCGCGGGTAGGCCGCCGGGAGTGGATAGGGCTCGGCGTCCTCGCCGCCGGTCTG 121 CTGCTTGGCGCCCATCCGGCGGCCCTCACCTATCCCGAGCCGCAGGAGCGGCGGCCAGAC

1561 GAGCAGGGCGACCACGGCAGGCTCGGCCCGGCCGGACCCGAGACCGCCGACGCGCTGTCC 1561 CTCGTCCCGCTGGTGCCGTCCGAGCCGGGCCGGCCTGGGCTCTGGCGGCTGCGCGACAGG

1621 GAGGGCTTCGCCGACGCCACCCGCTGGTCGCTGTTCGTCGCGGCCGGATTCCTCGCCGTC 1621 CTCCCGAAGCGGCTGCGGTGGGCGACCAGCGACAAGCAGCGCCGGCCTAAGGAGCGGCAG

1628 GGACTCGCAACCGCCACCCGACTGCAGCACCGACGCCCGGAGGACGACGACGCCGCGGCC 1628 CCTGAGCGTTGGCGGTGGGCTGACGTCGTGGCTGCGGGCCTCCTGCTGCTGCGGCGCCGG <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;"> 1741 ACCGCCACGGCGTAG 1741 T<span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GGCGGTGCCGC ATC <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">

<span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">Primer directo: 5’-CCC <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: red; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">AAGCTT <span style="background: yellow none repeat scroll 0% 0%; font-weight: normal; font-size: 10pt; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">CCGAATCTGCAACGG <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">-3’

Primer inverso:

5’-CCC <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: red; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">AAGCTT <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: rgb(51, 204, 204); font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">caccaccaccaccaccaccaccaccaccaccaccacca <span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; font-weight: normal; font-size: 10pt; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">CGCCGTGGCGG <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">-3’

EL CODÓN QUE CODIFICA PARA LA HYS ES CAC EL SITIO DE CORTE ES EL hIND iii <span style="text-transform: none; font-family: 'Courier New'; text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128);"> **//__ Diseño 5 __//// : mutagénesis dirigida de un codón // <span style="text-transform: none; font-family: 'Courier New'; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;"> code code
 * <span style="font-weight: normal; color: windowtext; text-shadow: none; mso-ansi-language: ES; textshadow: none; msoansilanguage: ES; msospacerun: yes;">         P  N  L  Q  R  I  Y  P  S  G  Q  R  R  L  W  W  N  R  G  S  V  V  S  R  R  A  T  G  R  K  A  H  T  M   F1 **

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 * R I  C  N  G  F  T  R  R  G  S  V  G  S  G  G  I  A  V  A  S  Y  R  D  A  P  P  G  E  R  R  T  P     F2 **

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 * E S  A  T  D  L  P  V  G  A  A  S  A  L V  E  S  R  *  R  R  I  E  T  R  H  R  E  K  G  A  H  H    F3 **

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 * 1 ccgaatctgcaacggatttacccg tcggggcagcgtcggctctggtggaatcgcggtagcgtcgtatcgagacgcgccaccgggagaaaggcgcacacca 100 **

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 * 1 ggcttagacgttgcctaaatgggcagccccgtcgcagccgagaccaccttagcgccatcgcagcatagctctgcgcggtggccctctttccgcgtgtggt 100 **

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 * T V  E  S  L  E  D  E  P  R  V  G  R  R  E  W  I  G  L  G  V  L  A  A  G  L         L  E  V  V  G  V  L  A  F  A  L  Y  L  R  P  S  S  A  A  W  L  L  A  L  L  L  A  I  Y  G  L  G  L  G   F1 **

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 * S R  W  S  A  S  W  R  S  R  C  T  C  G  R  R  R  R  R  G  C  W  R  C  C  S  R  S  T  A  S  G  W     F2 **

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 * R G  G  R  R  P  G  V  R  A  V  P  A  A  V  V  G  G  V  A  A  G  A  A  A  R  D  L  R  P  R  A  G    F3 **

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 * 1201 ctcgaggtggtcggcgt cctggcgttcgcg ctg tacctgcggccgtcg tcggcggcgtggctgctggcgctgctgctcgcgatctacggcctcgggctgg 1300 **

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 * 1201 gagctccaccagccgca ggaccgcaagcgc gac atggacgccggcagc agccgccgcaccgacgaccgcgacgacgagcgctagatgccggagcccgacc 1300 **

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 * L A  S  A  Q  L  T  G  T  V  L  V  D  I  P  T  S  E  S  G  Q  G  S  A  T  Q  S  T  V  R  Q  L  G    F1 **

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 * G S  R  R  R  S  S  P  A  R  F  S  S  T  S  R  R  R  S  P  A  R  D  R  R  R  R  A  R  S  V  S  W  A   F2 **

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 * A R  V  G  A  A  H  R  H  G  S  R  R  H  P  D  V  G  V  R  P  G  I  G  D  A  E  H  G  P  S  A  G     F3 **

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 * 1301 ggctcgcgtcggcgcagctcaccggcacggttctcgtcgacatcccgacgtcggagtccggccagggatcggcgacgcagagcacggtccgtcagctggg 1400 **

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 * 1301 ccgagcgcagccgcgtcgagtggccgtgccaagagcagctgtagggctgcagcctcaggccggtccctagccgctgcgtctcgtgccaggcagtcgaccc 1400 **

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 * L Q  H  R  R  P  E  D  D  D  A  A  A  T  A  T  A  *     F1 **

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 * C S  T  D  A  R  R  T  T  T  P  R  P  P  P  R  R  X    F2 **

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 * T A A  P  T  P  G  G  R  R  R  R  G  H  R  H  G  V  X   F3 **

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 * 1701 actgcagcaccgacgcccggaggacgacgacgccgcggccaccgccacggcgtag 1755 **

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 * 1701 tgacgtcgtggctgcgggcctcctgctgct gcggcgccggtggcggtgccgcatc 1800 **

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 * PRIMER 1: 5’-CTAGTCTAGA ccgaatctgcaacggatttacccg -3’ **

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 * PRIMER 2: 5’- cctggcgttcgcg gtg tacctgcggccgtcg -3’ **

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 * PRIMER 3: 5’- CGACGGCCGCAGGTA CAC CGCGAACGCCAGG -3’ **

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 * PRIMER 4: 5’-CTAGTCTAGA CTACGCCGTGGCGGTGGCCGCGGCG -3’ **

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 * gtc: V (valina) **

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 * ctg: L (leucina) **

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 * sitio de corte xba i **

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code code <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; line-height: 150%; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 10pt; font-family: 'Courier New'; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">1 <span style="background: yellow none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCGAATCTGCAACG GATTTACCCGTCGGGGCAGCGTCGGCTCTGGTGGAATCGCGGTAGC 1 GGCTTAGACGTTGCCTAAATGGGCAGCCCCGTCGCAGCCGAGACCACCTTAGCGCCATCG
 * //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Times New Roman'; text-shadow: none;">Diseño 6 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Times New Roman'; text-shadow: none;">: fusión con proteína fluorescente verde ( gfp) //****
 * //<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Secuencia de drug resistance efflux protein //

61 GTCGTATCGAGACGCGCCACCGGGAGAAAGGCGCACACCATGACCGTGGAATCGCTCGAG 61 CAGCATAGCTCTGCGCGGTGGCCCTCTTTCCGCGTGTGGTACTGGCACCTTAGCGAGCTC

121 GACGAACCGCGGGTAGGCCGCCGGGAGTGGATAGGGCTCGGCGTCCTCGCCGCCGGTCTG 121 CTGCTTGGCGCCCATCCGGCGGCCCTCACCTATCCCGAGCCGCAGGAGCGGCGGCCAGAC

1621 GAGGGCTTCGCCGACGCCACCCGCTGGTCGCTGTTCGTCGCGGCCGGATTCCTCGCCGTC 1621 CTCCCGAAGCGGCTGCGGTGGGCGACCAGCGACAAGCAGCGCCGGCCTAAGGAGCGGCAG

1681 GGACTCGCAACCGCCACCCGACTGCAGCACCGACGCCCGGAGGACGACGACGCCGCGGCC 1681 CCTGAGCGTTGGCGGTGGGCTGACGTCGTGGCTGCGGGCCTCCTGCTGCTGCGGCGCCGG

1741 A<span style="background: silver none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCGCCACGGCG TAG 1741 T<span style="background: aqua none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GGCGGTGCCGC ATC //<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">Secuencia de la gfp: // <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;"> 1 <span style="background: fuchsia none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GATGAGTAAAGGAG AAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGATGG 1 <span style="background: olive none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CTACTCATTTCCTC TTCTTGAAAAGTGACCTCAACAGGGTTAAGAACAACTTAATCTACC

61 TGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATACGG 61 ACTACAATTACCCGTGTTTAAAAGACAGTCACCTCTCCCACTTCCACTACGTTGTATGCC

121 AAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACT 121 TTTTGAATGGGAATTTAAATAAACGTGATGACCTTTTGATGGACAAGGTACCGGTTGTGA

661 TCTTGAGTTTGTAACAGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTATACAAATAA 661 AGAACTCAAACATTGTCGACGACCCTAATGTGTACCGTACCTACTT<span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">GATATGTTTATT <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New';">

Primer 1: 5’-GCTCTAGA <span style="background: yellow none repeat scroll 0% 0%; font-weight: normal; font-size: 10pt; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial; color: windowtext; font-family: 'Courier New';">CCGAATCTGCAACG -3’

PRIMER 2: 5’-<span style="background: olive none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CTCCTTTACTCATC <span style="background: aqua none repeat scroll 0% 0%; font-weight: normal; font-size: 10pt; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial; color: windowtext; font-family: 'Courier New';">CGCCGTGGCGG -3’

PRIMER 3: 5’-<span style="background: silver none repeat scroll 0% 0%; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial;">CCGCCACGGCG <span style="background: fuchsia none repeat scroll 0% 0%; font-weight: normal; font-size: 10pt; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New';">GATGAGTAAAGGAG <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New';">-3’

PRIMER 4: 5’-GCTCTAGA <span style="background: lime none repeat scroll 0% 0%; font-weight: normal; font-size: 10pt; -moz-background-clip: -moz-initial; -moz-background-origin: -moz-initial; -moz-background-inline-policy: -moz-initial; color: windowtext; font-family: 'Courier New';">TTATTTGTATAG -3’ <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New';">

Sitios de corte para Xba I <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New';"> <span style="font-size: 10pt; text-transform: none; font-family: 'Courier New'; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">__ TABLAS Y DATOS FOLOGENÉTICOS __ : <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: Times New Roman;"> **// S //// ecuencia de proteínas usadas en el alineamiento //**<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">: <span style="text-transform: none; text-shadow: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> >Corynebacterium amycolatum SK46 MSNPASNTSLNVNPRESAASKAAAPNPKAAVPVLLFSFVFCLVLDNGFKFMTKPIAESLDLSVSTASLQA TLAGILIGIGAVVYAALADSISIRKLMIVGIGFVAVGSLLGYFFQGVWPMVLTARIIQTAGLAAAETLYV IYVTKYLSPEDQKTYLGFSTAAFQAALLIGTLTSGIVATYVSWPAMFLISLILIVAIPFLIKTVPEEQQQ KSHLDIFGLFLIAVIATAVMLFMQKFQWWWLVVAALGVALFVWHIRAHDNAVVSPSFFTNARYVCALIVV LVVYMVQLGYSAILLPYMVDELYGINLDGAAYILAPGYLCAVIVGVMSGKVAKFLPSKQAIVVAISIIIV ALLIPAVLPGAGVATVIVSMILFPSGFALMYAPLVATALQSIPAAKSGVAIGFYNLTINIAVPVGIALTA MLVDSRPAFFSALSIAQSEAEGVSATIAWLLALMAVVGLLVYVISDRIINDTAENREKVHA >Corynebacterium amycolatum SK46 MSNPASNTSLNVNPRESAASKAAAPNPKAAVPVLLFSFVFCLVLDNGFKFMTKPIAESLDLSVSTASLQA TLAGILIGIGAVVYAALADSISIRKLMIVGIGFVAVGSLLGYFFQGVWPMVLTARIIQTAGLAAAETLYV IYVTKYLSPEDQKTYLGFSTAAFQAALLIGTLTSGIVATYVSWPAMFLISLILIVAIPFLIKTVPEEQQQ KSHLDIFGLFLIAVIATAVMLFMQKFQWWWLVVAALGVALFVWHIRAHDNAVVSPSFFTNARYVCALIVV LVVYMVQLGYSAILLPYMVDELYGINLDGAAYILAPGYLCAVIVGVMSGKVAKFLPSKQAIVVAISIIIV ALLIPAVLPGAGVATVIVSMILFPSGFALMYAPLVATALQSIPAAKSGVAIGFYNLTINIAVPVGIALTA MLVDSRPAFFSALSIAQSEAEGVSATIAWLLALMAVVGLLVYVISDRIINDTAENREKVHA >Nitrobacter sp. Nb-311A MAWFILFLAGLMEVGWAIGLKYTEGLTRLVPSVLTLTAMAISMGLLGLALKTLPIGTAYAVWTGIGAVGT AILGIVLFGDPATMARLACIGLIVAGIAGLKLVT >Mycobacterium tuberculosis H37Rv MTETASETGSWRELLSRYLGTSIVLAGGVALYATNEFLTISLLPSTIADIGGSRLYAWVTTLYLVGSVVA ATTVNTMLLRVGARSSYLMGLAVFGLASLVCAAAPSMQILVAGRTLQGIAGGLLAGLGYALINSTLPKSL WTRGSALVSAMWGVATLIGPATGGLFAQLGLWRWAFGVMTLLTALMAMLVPVALGAGGVGPGGETPVGST HKVPVWSLLLMGAAALAISVAALPNYLVQTAGLLAAAALLVAVFVVVDWRIHAAVLPPSVFGSGPLKWIY LTMSVQMIAAMVDTYVPLFGQRLGHLTPVAAGFLGAALAVGWTVGEVASASLNSARVIGHVVAAAPLVMA SGLALGAVTQRADAPVGIIALWALALLIIGTGIGIAWPHLTVRAMDSVADPAESSAAAAAINVVQLISGA FGAGLAGVVVNTAKGGEVAAARGLYMAFTVLAAAGVIASYQATHRDRRLPR >Acinetobacter baumannii AYE MSYLYLAIAIACEVIATSALKASQGFTVPIPSIITVVGYAVAFYLLSLTLKTIPIGIAYAIWSGAGIILI SAIGWIFYKQHLDLAACIGLALMIAGIVIINVFSKNTHL >Acinetobacter sp. ADP1 MMQKVWSISGRSIAVSALALALAACQSMRGPEPVVKADIPTSYTYNASGQSIAEQGYKDFFSDPRLLQVI ELALNNNRDLRTAALNIQRAQQQYQITENNQLPTIGASGSAIRQVSITRDPNNPYSTFQVGLGVTAYELD FWGRVRSLKDAALDNYLATQSTRDTTQISLVSQVAQAWLSYSFAVANLKLADQTLKAQLDSYNLNKKRFD VGIDSEVPLRQAQISVETARNDVANYKTQIVQAQNLLNLLVGQSVPQNLLPNQPVKSITRQNVFSTGLPS DLLNNRPDVKSAEYQLSAAGANIGAAKAALFPTISLTGSAGYASTQLSDLFKSGAGVWSIGPSLELPIFD WGTRRANIKISETDQKIALSNYEKSIQSAFREVNDALATRANIGDRISAQRRLVDATNTTYSLSNARFRA GIDNYLTVLDAQRTSYSAEQGLLLLEQANLNNQIELYKTLGGGLKANTTDTVVHQPSSADLKKK >Mycobacterium ulcerans Agy99 MLSTAMDEAHCTPAEVAPPDTRTGTSSPGEHVYPDRLDAGLLRIAGVCVLASLMSVLDATVVGIAQRTFI IEFDSTQAVVAWTMTGYTLALATVIPVAGWAADRFGTKRLWMGSVLAFALGSLLCALAPNILSLIFFRVL QGVGGGMLMPLGFIILTRAAGPKRLGRLMAAIGIPMLLGPIGGPILGGWLISSFGWHWIFLVNLPIGLAA FALAAITFPADRPVPSESFDVIGVLLLSPGLAAFLLALSLIPDRGTVADRYVLIPVIAGLSLIGGFAWHA WHRADHPLIDLHLFNNSVVTQANLTLLAFAAAYFGSSLLIPTYLQQVLHQTPMQSGLYLIPQGLGAMLTM PIASAFMDRRGPGKSVLLGIVLIAVGLAMFTFGVATRAQYLPTLLVGLAIMGMGTGCTMMPLAGAAVLTL KPREIARGSTLISVTQQVGGSIGTALMATILTNQFNRSDNIWVANKVATLEQNAAARGVTVDPSGLPPQA LTPDFADNVMHDLSHAYTVVFGVVVVLVVSTLIPAASLPKTPAAAPASFEQHHCDTQYGVHRV >Mycobacterium tuberculosis C MTGIDMLGNAMVEACPAEGDAPVPITPAGRPRSGQRSYPDRLDVGLLRTAGVCVLASVMAHVDVTVVSVA QRTFVADFGSTQAVVAWTMTGYMLALATVIPTAGWAADRFGTRRLFMGSVLAFTLGSLLCAVAPNILLLI IFRVVQGFGGGMLTPVSFAILAREAGPKRLGRVMAVVGIPMLLGPVGGPILGGWLIGAYGWRWIFLVNLP VGLSALVLAAIVFPRDRPAASENFDYMGLLLLSPGLATFLFGVSSSPARGTMADRHVLIPAITGLALIAA FVAHSWYRTEHPLIDMRLFQNRAVAQANMTMTVLSLGLFGSFLLLPSYLQQVLHQSPMQSGVHIIPQGLG AMLAMPIAGAMMDRRGPAKIVLVGIMLIAAGLGTFAFGVARQADYLPILPTGLAIMGMGMVCSMMPLSGA AVQTLAPHQIARGSTLISVNQQVGGSIGTALMSVLLTYQFNHSEIIATAKKVALTPESGAGRGAAVDPSS LPRQTNFAAQLLHDLSHAYAVVFVIATALVVSTLIPAAFLPKQQASHRRAPLLSA <span style="font-weight: normal; font-size: 10pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: Times New Roman;"> : <span style="font-family: Times New Roman; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> **//Alineamiento de protínas//**//<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: // <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 11pt; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">

<span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> ** //__ G __////__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">ráfica 1 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: Árbol filogenético // __<span style="font-weight: normal; font-size: 14pt; line-height: 150%; text-shadow: none; color: rgb(128, 0, 128);">PROPIEDADES DE LA DRUG RESISTANCE EFFLUX PROTEIN __<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: <span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> ** //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Gráfica 3: __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> Zonas transmembrana de la proteína //<span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> <span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Gráfica 2 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: Proteína sin péptido líder // <span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Gráfica 7 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: Proteína no coiled-coil // <span style="color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">__ características fisico-químicas __ : <span style="font-weight: normal; font-size: 14pt; line-height: 150%; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> ** //Valor de los aminoácidos:// <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;">Ala: 89.000 Arg: 174.000 Asn: 132.000 Asp: 133.000 Cys: 121.000 Gln: 146.000 Glu: 147.000 Gly: 75.000 His: 155.000 Ile: 131.000 Leu: 131.000 Lys: 146.000 Met: 149.000 Phe: 165.000 Pro: 115.000 Ser: 105.000 Thr: 119.000 Trp: 204.000 Tyr: 181.000 Val: 117.000 : 132.500 : 146.500 : 136.750
 * <span style="font-weight: normal; text-decoration: none; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">
 * <span style="font-weight: normal; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">
 * <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">

<span style="font-size: 13.5pt; font-family: 'Courier New'; color: rgb(0, 0, 221); text-decoration: none;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;"> **<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Gráfica 4: __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Valor individual de los aminoácidos según su peso molecular // <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 13.5pt; line-height: 150%; font-family: 'Courier New'; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-size: 13.5pt; line-height: 150%; font-family: 'Courier New'; color: rgb(0, 0, 221); text-decoration: none;"> <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Gráfica 5 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: Hidrofobidad de la proteína // <span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-size: 13.5pt; line-height: 150%; font-family: 'Courier New'; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-size: 13.5pt; line-height: 150%; font-family: 'Courier New'; color: rgb(0, 0, 221); text-decoration: none;"> //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Gráfica 6 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">: Polaridad de la proteína // __<span style="font-weight: normal; font-size: 14pt; line-height: 150%; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">Tablas: __ <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">

** <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> //__<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">Tabla 1 __////<span style="font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> : Enzimas que cortan la secuencia de la proteína // ** <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: Arial; text-shadow: none;">: <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; font-family: 'Courier New'; text-shadow: none;"> __<span style="font-weight: normal; font-size: 14pt; color: rgb(128, 0, 128); font-family: Times New Roman;">Bibliorafía: __<span style="background-color: rgb(255, 255, 0);">(en qué parte del texto es citada esta bibliografía?????) <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; text-decoration: none; font-family: Times New Roman;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">1.<span style="font-family: 'Times New Roman'; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: normal; font-size: 7pt; line-height: normal; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;"> Beckmann,R.; Toye, A. M.; Smythe, J.S.; Antee, D.J.; Tanner, M.J.(2002) <span style="font-family: timesroman; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">An N-terminal GFP tag does not alter the functional expression to the plasma membrane of red cell and kidney anion exchanger (AE1) in mammalian cells <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">2.<span style="font-family: 'Times New Roman'; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: normal; font-size: 7pt; line-height: normal; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Boiron, P.; Provost, F.(1990). <span style="font-family: timesroman; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Characterization of Nocardia, Rhodococcus and Gordona species by in vitro susceptibility testing. <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> 3.<span style="font-family: 'Times New Roman'; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: normal; font-size: 7pt; line-height: normal; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Fulman, N; <span style="font-family: timesroman; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Bibi, E.(2009) Bacterial multidrug transport through the lens of the major facilitator superfamily <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> 4.<span style="font-family: 'Times New Roman'; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: normal; font-size: 7pt; line-height: normal; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Gibert,S.; Bakalara,N.; Santarelli, X. (2000)Three-step chromatographic purification procedure for the production of a his-tag recombinant kinesin overexpressed in E. coli <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> 5.<span style="font-family: 'Times New Roman'; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: normal; font-size: 7pt; line-height: normal; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Gurtler,V. Mayall, B.C.; Seviou,R. (2004) <span style="font-family: timesroman; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Can whole genome analysis refine the taxonomy of the genus Rhodococcus? <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> 6.<span style="font-family: 'Times New Roman'; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: normal; font-size: 7pt; line-height: normal; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Fournier,H.; Hawari,J.; Halasz,A; Strager,S.H.; Mc Clay,K.R:; Masuda, H.; Hatzinger,P.B. (2009) <span style="font-family: timesroman; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Aerobic Biodegradation of N-Nitrosodimethylamine by the Propanotroph Rhodococcus ruber ENV425 <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;"> 7.<span style="font-family: 'Times New Roman'; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: normal; font-size: 7pt; line-height: normal; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Liu,Y.H.; Di,Y.M.; Zhou,Z.W.; Mo,S.L.; Zhou,S.F.(2009) <span style="font-family: timesroman; color: rgb(128, 0, 128);"> <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; font-family: timesroman; text-shadow: none;">Multidrug Resistance Associated Proteins and Implications in Drug Development  <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; line-height: 150%; text-shadow: none;">
 * <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">Nombre de la enzima || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">Número de cortes || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">Posición de los cortes ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Arg-C proteinase] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">37 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">5 12 13 18 24 25 29 44 47 48 108 112 115 116 146 169 171 173 230 307 309 311 313 324 383 388 393 414 464 490 509 520 527 548 567 571 572 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Asp-N endopeptidase] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">20 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">40 65 78 83 86 110 171 238 270 318 446 488 505 509 523 536 544 574 575 576 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Asp-N endopeptidase + N-terminal Glu] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">38 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">36 39 40 41 48 65 78 79 83 86 110 136 171 227 238 258 270 305 318 341 401 446 451 488 491 500 505 509 520 523 533 536 540 544 573 574 575 576 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|BNPS-Skatole] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">15 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">15 16 50 90 180 197 204 206 265 266 279 305 330 420 549 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|CNBr] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">7 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">34 117 132 187 336 371 396 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Chymotrypsin-high specificity (C-term to [FYW, not before P)]] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">42 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">15 16 50 90 95 99 119 126 168 177 180 197 202 206 208 223 250 255 265 266 275 302 305 314 323 325 328 330 343 352 357 366 376 389 409 412 420 429 543 549 552 557 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Chymotrypsin-low specificity (C-term to [FYWML, not before P)]] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">134 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">3 14 15 16 32 34 39 50 53 56 60 62 81 83 85 90 95 99 102 103 104 109 113 117 118 119 126 131 132 142 155 161 168 177 180 187 193 194 197 198 202 206 208 209 217 223 224 238 243 244 245 250 253 255 257 265 266 272 273 275 299 302 305 308 314 318 320 322 323 325 326 328 330 336 343 345 346 347 351 352 353 357 359 362 366 368 371 373 376 384 389 396 397 399 401 407 409 411 412 413 420 421 422 424 425 426 429 431 433 435 440 445 466 470 475 479 481 483 485 487 491 504 525 528 539 543 549 551 552 557 558 562 568 570 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Clostripain] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">37 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">5 12 13 18 24 25 29 44 47 48 108 112 115 116 146 169 171 173 230 307 309 311 313 324 383 388 393 414 464 490 509 520 527 548 567 571 572 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Formic acid] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">20 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">41 66 79 84 87 111 172 239 271 319 447 489 506 510 524 537 545 575 576 577 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Glutamyl endopeptidase] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">18 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">37 40 42 49 80 137 228 259 306 342 402 452 492 501 521 534 541 574 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Iodosobenzoic acid] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">15 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">15 16 50 90 180 197 204 206 265 266 279 305 330 420 549 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|LysC] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">3 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">30 232 267 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|LysN] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">3 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">29 231 266 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|NTCB (2-nitro-5-thiocyanobenzoic acid)] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">2 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">158 332 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Pepsin (pH1.3)] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">208 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">3 16 38 39 52 53 55 56 59 60 61 62 74 80 81 82 83 84 85 89 90 94 95 98 99 101 102 102 103 103 104 109 113 119 125 126 130 131 141 142 154 155 157 160 161 167 168 176 177 179 180 192 194 196 197 197 198 201 202 204 205 207 208 208 209 216 217 222 223 223 224 238 242 243 243 244 244 245 249 250 252 253 254 255 256 257 264 265 265 271 272 274 279 298 299 301 302 304 305 314 317 318 319 320 321 322 322 323 325 327 329 330 342 343 344 345 345 346 346 347 349 350 352 352 353 356 357 358 359 361 362 365 366 367 368 372 373 375 376 389 396 397 398 399 400 401 406 407 408 409 410 411 411 412 412 419 420 420 421 421 422 423 424 424 425 425 426 428 429 430 431 432 433 434 435 439 440 444 445 465 469 470 474 475 478 479 480 481 482 483 486 503 504 538 539 542 543 549 551 551 552 556 557 557 558 561 562 568 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Pepsin (pH>2)] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">177 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">3 38 39 52 53 55 56 59 60 61 62 74 80 81 82 83 84 85 98 99 101 102 102 103 103 104 109 113 119 125 126 130 131 141 142 154 155 157 160 161 167 168 176 177 192 194 197 198 201 202 207 208 208 209 216 217 222 223 223 224 238 242 243 243 244 244 245 249 250 252 253 254 255 256 257 271 272 274 298 299 301 302 317 318 319 320 321 322 322 323 325 327 342 343 344 345 345 346 346 347 349 350 352 352 353 358 359 361 362 367 368 372 373 375 376 389 396 397 398 399 400 401 406 407 408 409 410 411 412 420 421 421 422 423 424 424 425 425 426 430 431 432 433 434 435 439 440 444 445 465 469 470 474 475 478 479 480 481 482 483 486 503 504 538 539 542 543 551 551 552 556 557 557 558 561 562 568 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;"> [|Proline-endopeptidase] [ pro_note#[*] pro_note|[*]]]   || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">3 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">268 415 573 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Proteinase K] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">339 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">3 6 7 14 15 16 21 22 26 27 31 33 35 36 39 45 50 51 53 55 56 57 58 60 62 63 64 65 68 69 70 72 74 76 77 78 81 83 85 86 88 90 91 94 95 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 109 113 118 119 120 121 123 124 125 126 127 131 133 134 135 140 141 142 143 144 145 147 148 151 154 155 156 157 160 161 163 164 166 167 168 174 175 176 177 179 180 182 183 184 188 189 190 193 194 197 198 199 200 202 203 204 206 207 208 209 210 212 214 216 217 218 219 220 222 223 224 225 226 229 231 233 234 235 238 240 241 243 244 245 247 248 250 252 253 254 255 256 257 258 262 263 265 266 269 270 272 274 275 277 278 279 282 283 285 287 288 290 291 292 293 294 296 297 298 299 300 302 303 304 305 310 312 314 316 317 318 320 322 323 325 327 328 330 334 335 337 338 339 340 343 345 346 347 348 349 351 352 353 354 356 357 359 361 362 364 366 367 368 369 370 372 373 375 376 377 380 381 382 385 386 387 389 394 395 397 399 400 401 403 404 406 407 408 409 410 411 412 413 418 419 420 421 422 423 424 425 426 427 428 429 431 433 435 436 438 440 441 443 444 445 446 448 450 458 459 462 463 466 468 469 470 472 473 474 475 477 478 479 481 483 484 486 487 488 491 494 495 496 500 504 505 508 512 515 516 519 528 531 535 536 538 539 543 544 546 547 549 551 552 553 554 555 557 558 559 560 562 563 564 565 566 568 578 579 580 581 582 583 584 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Staphylococcal peptidase I] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">18 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">37 40 42 49 80 137 228 259 306 342 402 452 492 501 521 534 541 574 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Thermolysin] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">262 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">2 5 13 20 21 25 30 33 35 38 44 50 52 54 55 56 57 59 61 62 63 64 68 69 71 75 76 77 82 90 93 96 97 98 99 100 101 102 103 105 108 112 116 117 118 119 120 122 123 124 125 126 130 131 132 133 134 140 141 142 143 144 146 147 150 153 154 155 160 163 165 167 173 174 175 176 178 181 182 183 186 187 188 189 192 193 197 201 206 207 208 209 213 215 216 217 218 219 221 222 223 230 232 237 240 242 243 244 246 247 249 251 252 253 254 255 256 257 262 268 269 273 274 276 284 286 289 290 291 292 293 295 296 297 298 299 301 302 303 309 311 315 316 317 321 322 324 327 334 335 336 337 338 339 344 345 346 347 350 351 352 353 355 358 361 363 366 367 368 369 370 371 372 374 375 376 379 380 381 384 386 388 394 395 396 398 399 400 403 405 406 407 408 409 410 412 417 418 420 421 422 423 424 425 426 427 430 432 434 435 437 439 443 444 445 457 462 465 467 468 469 472 473 474 477 478 480 482 483 485 486 490 493 494 499 503 504 511 518 527 530 535 538 542 543 550 551 552 553 554 556 557 558 559 561 562 564 567 578 579 581 583 ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;"> ||
 * <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none;">[|Trypsin] || <span style="display: block; text-align: center; font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">38 || <span style="font-weight: normal; font-size: 12pt; text-transform: none; color: windowtext; text-shadow: none; font-family: Times New Roman;">5 12 13 18 24 25 29 30 44 47 48 108 112 115 116 146 169 171 173 230 232 267 307 309 311 313 324 383 388 393 464 490 509 520 527 548 567 571 ||